총 당 정량법(Phenol sulfuric acid method)

총 당 정량법

 

 

 

(Phenol-sulfuric acid method by UV-Vis Spectrophotometer)

 

 

Phenol sulfuric acid 방법은 식품의 전당 함량을 구하는 방법이다. 전당이란 식품 전체에서 조단백, 지방질, 수분, 그리고 회분량을 뺀 나머지를 말한다. 이 방법은 간단하고, 신속, 정확하며 탄수화물에 특이적이다. 그리고, 탄수화물에 특이적이고 넓은 적용범위를 가진다는 장점을 가지고 있다. 황산을 사용하기 때문에 cellulose 같은 고분자 물질도 미리 가수분해하지 않고도 시료로 사용할 수 있다. 정량의 원리는 유도체의 값을 측정하는 것인데, 시료를 환원당을 진한 황산으로 처리하게 되면, 탈수가 되어 furfural 또는 그 유도체가 되게 된다. furfural은 heterocyclic aldehyde의 하나로써 분자식은 C5H4O2이다. furfural과 그 유도체는 phenol류나 방향족 amine류에 의해서 발색하게 되는데, UV spectrophotometer를 이용하여 이 물질들의 흡광도(absorbance)의 값을 측정하여 당의 양을 구하는 것이다. 즉, UV spectrophotometer를 이용하여 470 nm에서 standard solution(sucrose or maltose)을 이용하여 standard curve를 그리고, 그 추세선의 직선식을 이용하여, unknown sample의 농도를 계산, 정량 분석을 한다.

 

1. 실험재료 및 시약

 

표준 당 용액 : 5 % Phenol solution, conc. H2SO4, 0.01 % maltose solution

분석기기: UV-Vis Spectrophotometer, test tube, 은박호일, pipette, vortex mixer. D.W

 

2. 실험방법

1. Standard solution과 unknown sample을 준비한다.

⇒ 측정하려는 sample과 농도별 Maltose solution(0, 25, 50, 75, 100 ug ml-1)을 준비한다.

 

2. test tube와 test tube rack을 준비하고, 각 tube에 0.5 ml씩 농도별로 준비된 maltose

solution을 넣는다.

 

3. 안정된 발색을 위해 5 % Phenol solution 0.5 ml을 넣고 vortex 해준다.

 

4. H2SO4(conc.)를 2.5 ml 넣고 sample을 발열시킨다.

(탈수과정 : maltose의 a-1,4 bond를 파괴시키기 위한 과정)

 

5. 은박호일로 입구를 sealing한 후, 20분간 정치시킨다.

 

6. UV-Vis Spectrophotometer를 켜고 sample 측정할 준비를 한다.

⇒ prepare the cuvette, Turn on the D2 lamp, input the wave length, check the base line,

waste bottle, tissue, D.W, blank test)

 

7. 완전히 식힌 test tube sample을 cuvette에 넣고 470 nm의 파장에서 Absorbance(흡광도) 값을

측정한다.

 

8. standard solution을 이용하여 standard curve를 구하고, standard curve에서 나온 식을 이용

하여 unknown sample의 농도를 계산한다.