단백질 정량 방법

  Bradford 방법을 이용한 단백질 정량

 

단백질은 그 속에 포함된 tyrosine이나 tryptophan과 같은 아미노산의 함량에 따라 280nm 에서 강하게 흡수된다. 이것은 감도가 좋고 또한 단백질을 파괴하지 않고 분석하는 방법 이다. 보통 단백질은 peptide bond 때문에 원자외선영역 외에도 흡수된다. 그러나 특이한 단백질을 측정 할 경우에는 Coomassie 염료약으로 착색하여 595nm에서 흡광도를 측정할 수 있고, 이러한 실험결과로부터 미지의 단백질의 농도를 계산할 수 있다.

Bradford assay는 Lowry assay처럼 빠르게 단백질정량을 하는데 이용된다.

 

Bradford assay

1.  Bradford reagent(5X)를 1:5의 비율로 증류수에 희석한다 (working solution).

    (10 ml 용액을 만드는 경우 2 ml Bradford reagent와 8ml 증류수를 섞어준다)

2.  BSA standard을 준비한다.

3.  1 ml Bradford reagent working solution에 BSA standard를 넣어주고 5분간 상온에 방치한

     후 spectrophotometer를 이용하여 595nm에서 흡광도를 측정한다.

4.  최신 spectrophotometer는 자체적으로 regression curve를 그려주고 샘플의 단백질량을

     찾아주는 프로그램이 내장되어 있으나 옛 버전인 경우에는 계산기를 이용하여 linear  

     regression curve에서 기울기와 y절편을 직접 계산해야 한다.

5.  시료단백질을 같은 방법으로 처리하여 step4에서 얻은 standard curve로부터 단백질량을

     도출한다.