PCR purification

1. PCR sample을 냉장고에서 꺼내어 10 분정도 녹인다.

 

2. Microtube rack에 microtube를 sample수에 맞게 놓고, sample을 옆에 가져다 놓는다

 

3. Buffer PB를 준비하고, PCR sample과 Buffer PB를 1:5의 비율로 섞는다

    ⇒ microtube에 Buffer PB를 500㎕넣고 PCR sample을 100㎕ 넣는다

        이때, PCR tube에 남아 있는 약간의 sample까지 취하기 위해 Buffer PB를 다시한번 PCR 

        tube에 넣고, 잘 섞어준 후 다시 취하여 tube에 넣어준다

4. Spin column을 준비하고, 그 안에 sample을 넣어주고, 10000 rpm으로 1 분간 centrifuge한다

5. Centrifuge가 끝나면 spin column의 아랫부분에 flow-through된 용액을 제거한다.

    ⇒ Centrifuge하는 동안, tissue를 준비하고, column의 아래에 빠져나온 용액을 따라버리고, 

        tissue위에 거꾸로 톡톡 털어 완전히 용액을 제거한 후, 다시 끼우고, 0.75 ㎖의 PE buffer를

        넣고, 1 분간 다시 centrifuge한다.

6. 같은 방법으로 flow-through 용액을 버리고, 아직 남아있는 PE buffer를 제거하기 위해 한번

    더 centrifuge한다.(2 분)

7. 새로운 microtube를 준비하고, Ice위에 끼워 놓는다.

8. 원심분리가 끝나면, spin column의 membrane을 분리하여, microtube에 넣는다.

9. 50 ㎕의 Buffer EB를 넣어준다

    ⇒ 넣을때 기벽에 묻지 않도록 주의하며, 정 중앙에 떨어뜨리도록 한다. membrane에 골고루

        스며들도록 하며 특히, membrane에 tip이 닫지 않도록 주의한다.

10. 1 분간 놓아둔 후, 다시 1 분간 centrifuge한다.

11. centrifuge가 끝나면 microtube위의 membrane은 버리고 뚜껑을 닫고, label 후 -20 ℃에서

     보관 한다.